活细胞拍摄---选对仪器和相机是关键

宽场显微镜采用“面成像”，即一个时间点获得一整个二维图像，区别于点扫描共聚焦的“点成像”，即每个时间点只能获得一个点的信息，通过逐点扫描获得二维或者三维图像的信息。因此宽场显微镜较点扫描共聚焦成像具有时间分辨率高和光毒性低的优势，因此在快速以及活细胞成像方面都具有明显的优势。而我们平台的高分辨率活细胞成像系统更是在传统宽场成像显微镜基础上进行了光路优化，并配备了高灵敏度/大视野相机(EMCCD和sCMOS)和还原性反卷积技术，不仅具备快速的图像采集能力和低光毒性，同时提升了宽场显微镜的分辨率。

电荷耦合元件（CCD）和互补金属氧化物半导体（CMOS）是一块基于硅的半导体芯片，具有二维矩阵的光电传感器或像素，在曝光时，这些像素能够储存光电子，每个像素中的光子数量被数字化，然后显示在电脑检测器或其他检测设备中。

增益是指感光材料对光的灵敏度，增益值越大，灵敏度越高，同时对噪音的识别能力也越强，但EMCCD本身具备制冷功能，-80度的环境可以有效抑制噪音的产生。

本平台的高分辨率活细胞成像系统配备了EMCCD和sCMOS两台相机。sCMOS相机每一个像素位置都安置了一个放大装置，采用每一列同时读取的方式采集信号，因此它具有超高的分辨率和超快的拍摄速度（图1）。此外，2048×2048大视野的拍摄也是超吸引人的哦！But，sCMOS相机的增益值是固定的，不可调节，所以如果想增加信号的识别能力，只能通过提高激光强度和曝光时间，而对于比较敏感的细胞或信号较弱的样品，这并不是最好的选择。However，EMCCD相机的增益值是可调的。因此，在不改变激光强度和曝光时间的前提下，提高增益值可直接提高对弱信号的识别能力。

图1.sCMOS和EMCCD图像传感器的设计.

两种相机都有各自的特点（表一），同学们可根据自己的实验需要选择合适的相机。

表一  两种相机的参数的比较.

	sCMOS		EMCCD
最大视野拍摄范围	2048×2048		512×512
工作温度	5℃		-80℃
读出速度	95和286MHz		5和10MHz
增益	1（固定值）		1-1000
Pixel size（μm）	100×	0.0324	0.0804
	60×	0.0540	0.1340
	40×	0.0800	0.1984
	20×	0.1610	0.3993
	10×	0.3146	0.7804

想要了解更多资讯，就来参加我们的培训吧!

具体培训事宜如下：

培训内容：

1.仪器的工作原理及使用：还原性反卷积技术、多点拍摄、活细胞长时程拍摄、大图拼接。

2.适用于该仪器的样品介绍

培训时间：2017年12月28日 周四上午 9:00-11:00

培训地点：清华大学郑裕彤医学楼E225

报名方式：发送邮件至imagingfacility@biomed.tsinghua.edu.cn或拨打电话62772736/83170报名，并说明姓名、课题组、手机号、学号和院系。

备注：为保证培训效果，报名人数上限为5名，报完为止。该仪器在本学期还会举办多次小型培训，报名较晚的同学顺延至下一次培训。

收费：本次培训校内免费。